Arbejdspraksis for fluorescensmikroskop (med figur)
Læs denne artikel for at lære om arbejdet med fluorescensmikroskop!
Arbejdsbegrænsning:
Mange stoffer absorberer lys. Men nogle af dem, efter at have absorberet lys af en bestemt bølgelængde og energi, udsender lys af en længere bølgelængde og mindre energi.
Sådanne stoffer kaldes 'fluorescerende stoffer'.
Anvendelse af dette fænomen er grundlaget for fluorescensmikroskop. I praksis er mikrober farvet med et fluorescerende farvestof og derefter belyst med blåt lys. Farvestoffet absorberer blåt lys (kortere bølgelængde) og udsender grønt lys (længere bølgelængde).
I et fluorescensmikroskop anvendes en høj-intensitets kviksølvbue-lampe som lyskilden (figur 4.11). Den udsender hvidt lys, som passerer gennem et 'exciter filter'. Det tillader kun den blå komponent i det hvide lys (det hvide lys består af syv farver, som i den faldende rækkefølge af bølgelængde er violet, indigo, blå, grøn, gul, orange og rød) for at passere igennem den og blokerer alle andre farvekomponenter.
Et dikroisk spejl, som afspejler blåt lys, men tillader, at det grønne lys bruges på det blå lys. Spejlet er fastgjort i en sådan vinkel, at det blå lys reflekteres nedad til prøven.
Prøven er farvet med et fluorescerende farvestof, såsom acridin orange NO, acridin gul, acriflavin, thioflavin S, thioflavin T eller titan gul G. Visse dele af prøven bevarer farvestoffet, mens andre ikke gør det. De portioner, der bevarer det fluorescerende farvestof, absorberer blåt lys og udsender grønt lys. Det udsendte grønne lys går opad og passerer gennem det dikroiske spejl. Det reflekterer tilbage blåt lys, hvis nogen, og tillader kun grønt lys at passere igennem.
Derefter når lyset et 'barrierefilter'. Det tillader grønt lys at passere til øjet og blokerer alt tilbageblåt lys fra prøven, som måske ikke helt er reflekteret af det dikroiske spejl.
Således opfatter øjet de farvede dele af prøven som et glødende grønt objekt mod en jet-sort baggrund, hvorimod de ufarvede dele af prøven forbliver usynlige.
