Biologiske metoder til lægemiddelevaluering

Når fysiske eller kemiske metoder til evaluering eller kvantitet af prøve er meget mindre, er ikke i stand til at producere tilfredsstillende resultat i lægemidler, vurderes lægemidlet ved biologiske evalueringsmetoder. Disse metoder udføres på levende dyr, isolerer levende organ og væv, animalsk præparation og mikroorganisme. De biologiske metoder til evaluering udføres på levende organismer kaldes bioassay eller biologisk analyse.

Følgende metode anvendes som:

1. Anti-inflammatorisk aktivitet af lægemidler

2. Antipyretisk aktivitet af lægemidler

3. Antidiabetisk aktivitet af lægemidler

4. Analgetisk aktivitet af lægemidler

5. Antiulceraktivitet af lægemidler

6. Antelmintisk aktivitet af lægemiddel: De udføres på jordorm

7. Hjerteaktivitet af lægemiddel: Hjerteglycosiderne vurderes på frø og due

8. Mikrobiologiske metoder: de levende bakterier, gær og skimmelsvampe anvendes til at analysere vitaminer og bestemme aktiviteten af ​​antibiotika.

Anti-inflammatorisk aktivitet af lægemiddel:

Paw ødem metode:

Male eller kvindelige Sprague-Dawley rotter med en kropsvægt mellem 100 og 150 g anvendes. Dyrene sultes natten over. For at sikre ensartet hydrering modtager rotterne 5 ml vand via maverør (kontroller) eller testlægemidlet opløst eller suspenderet i samme volumen. 30 minutter senere udfordres rotterne ved en subkutan injektion af 0, 05 ml 1% opløsning af karrageen an i plantarsiden af ​​den venstre bagpote. Poten er mærket med blæk på niveauet af lateral malleolus og nedsænket i kviksølv op til dette mærke.

Potevolumenet måles pletysmografisk umiddelbart efter injektion, igen 3 og 6 timer og i sidste ende 24 timer efter udfordring. Forøgelsen af ​​potevolumen efter 3 eller 6 timer beregnes som procent sammenlignet med volumenet målt umiddelbart efter injektion af irriterende for hvert dyr.

Effektivt behandlede dyr viser meget mindre ødem. Forskellen mellem gennemsnitsværdier mellem behandlede dyr og kontrolgrupper beregnes for hvert tidsinterval og statistisk evalueres. Forskellene ved de forskellige tidsintervaller giver nogle antydninger for varigheden af ​​den antiinflammatoriske virkning. En dosis-responskurve køres for aktive lægemidler, og ED _50- værdier kan bestemmes.

Bomuld uld granulom metode:

Male Wister rotter med en gennemsnitsvægt på 200 g bedøves med ether. Bagsiden er barberet og desinficeret med 70% ethanol. Et snit er lavet i lænderegionen. Ved stumpede tænger dannes der subkutane tunneler, og en steriliseret bomuldspellet placeres på begge sider i det scapulære område.

Pellets er enten standardiseret til brug i tandpleje, der vejer 20 mg eller pellets dannet af rå bomuld, hvilket giver en mere udtalt inflammation end bleget bomuld. Dyrene behandles i 7 dage subkutant eller oralt.

Derefter ofre dyrene, pelletsene fremstilles og tørres, indtil vægten forbliver konstant. Netto tørvægt, dvs. efter fradrag af vægten af ​​bomuldspellet, bestemmes. Gennemsnitsvægten af ​​pelleterne i kontrolgruppen såvel som af testgruppen er beregnet. Den procentvise ændring af granulomvægten i forhold til vehikelkontrolgruppen bestemmes.

Antipyretisk aktivitet af lægemiddel:

Kaniner af begge køn og forskellige stammer med en kropsvægt mellem 3 og 5 kg kan anvendes. Dyrene placeres i egnede bur og termoelementer forbundet med en automatisk optager indføres i endetarmen. Dyrene får lov til at tilpasse sig til burene i 60 minutter.

Derefter injiceres 0, 2 ml / kg indeholdende 0, 2 μg lipopolysaccharid intravenøst ​​i kaninøret. Sixty minutter senere administreres testforbindelsen enten subkutant eller oralt. Kropstemperaturen overvåges i mindst 3 timer.

Et fald i kropstemperaturen for mindst 0, 5 ° C i mere end 30 minutter sammenlignet med temperaturværdien før administration af testforbindelsen betragtes som positiv effekt. Dette resultat er fundet efter 45 mg / kg phenylbutazon subkutan eller 2, 5 mg / kg indomethacin subkutan.

Antidiabetisk aktivitet af stoffer:

Streptozotocin-induceret diabetes:

Male Wister rotter vejer 150-220 g fodret med en standard kost injiceres intravenøst ​​med 60 mg / kg streptozotocin (Calbiochem). Som med alloxan observeres tre faser af blodglucoseændringer. I begyndelsen øges blodglukosen og når værdier på 150-200 mg% efter 3 timer. Seks otte timer efter streptozotocin øges seruminsulinværdierne op til 4 gange, hvilket resulterer i en hypoglykæmisk fase, som efterfølges af vedvarende hyperglykæmi. Alvorlighed og udbrud af diabetiske symptomer afhænger af dosis streptozotocin.

Efter dosis på 60 mg / kg intravenøs. Symptomer opstår allerede efter 24-48 timer med hyperglykæmi op til 800 mg%, glukosuri og ketonæmi. Histologisk nedbrydes beta-cellerne eller endog nekrotisk. En stabil tilstand nås efter 10-14 dage, hvilket tillader anvendelse af dyrene til farmakologiske test.

Alloxaninduceret diabetes: Kaniner med en vægt på 2, 0 til 3, 5 kg infunderes via ørevenen med 10 mg / kg alloxanmonohydrat (5, 0 g / 100 ml, pH 4, 5) i 10 minutter, hvilket resulterer i, at 70% af dyrene bliver hyperglykæmiske og uricosuriske. Resten af ​​dyrene dør enten eller er kun midlertidigt hyperglykæmisk.

Analgetisk aktivitet af lægemiddel:

Hot Plate Metode:

Grupper på 10 mus af begge køn med en initialvægt på 18 til 22 g anvendes til hver dosis. Kogepladen, som er kommercielt tilgængelig, består af en elektrisk opvarmet overflade. Temperaturen styres for 55 ° til 56 ° C. Dette kan være en kobberplade eller en opvarmet glasoverflade. Dyrene anbringes på varmepladen, og tiden til, at enten slikke eller hoppe optræder, registreres med stopur. Latensen registreres før og efter 20, 60 og 90 minutter efter oral eller subkutan administration af standarden eller testforbindelsen.

Tail immersion test:

Unge kvindelige Wister rotter (170-210 g legemsvægt) anvendes. De er anbragt i individuelle fastholdelsesburer, der forlader halen, der hænger frit ud. Dyrene får lov til at tilpasse sig burene i 30 minutter før testning. Den nedre 5 cm del af halen er markeret. Denne del af halen er nedsænket i en kop frisk fyldt vand på præcis 55 ° C. Inden for få sekunder reagerer rotten ved at trække halen tilbage. Reaktionstiden registreres i 0, 5 s enheder med stopur. Efter hver bestemmelse tørres halen omhyggeligt.

Reaktionstiden bestemmes før og periodisk efter enten oral eller subkutan administration af teststoffet, f.eks. Efter 0, 5, 1, 2, 3, 4 og 6 timer. Afskæringstidspunktet for nedsænkning er 15 s. Tilbagetrækningen af ​​ubehandlede dyr er mellem 1 og 5, 5 s. En tilbagetrækningstid på mere end 6 s betragtes derfor som et positivt svar.

Heffner's hale klip metode:

En arterieklip påføres til musenes hale, og reaktionstiden noteres. Mandlige mus (Charles River-stamme eller andre stammer) med en vægt mellem 18 og 25 g anvendes. Kontrolgruppen består af 10 mus. Testforbindelserne indgives subkutant til fodret mus eller oralt til fastede dyr. Testgrupperne og kontrolgruppen består af 7-10 mus.

Lægemidlet administreres 15, 30 eller 60 minutter forudgående testning. En arterieklip påføres til roten af ​​halen (ca. 1 cm fra kroppen) for at fremkalde smerte. Dyret reagerer hurtigt på denne skadelige stimulus ved at bide klemmen eller halen tæt på klippens placering. Tiden mellem stimulering og respons er målt ved et stopur i intervaller på 1/10 sekunder.

Antiulceraktivitet :

Pylorus ligering hos rotter (Shay Rat):

Kvinde Wister rotter, der vejer 150-170 g, sultes i 48 timer med adgang til drikkevand ad libitum. I løbet af denne tid er de anbragt enkelt i bur med hævede bund af bred trådnet for at undgå kannibalisme og coprophagy. Ti dyr anvendes per dosis og som kontrol. Under æstetæst er der foretaget et midtergående abdominal snit. Pylorus er legateret, pleje udøves, som ikke beskadiger blodet.

Der er ingen forsyning eller trækkraft på pylorerne. At gribe maven med instrumenter er at blive omhyggeligt undgået; ellers ulceration vil uundgåeligt udvikle sig på sådanne punkter. Abdominalvæggen er lukket af suturer. Testforbindelserne gives enten oralt ved hjælp af gavager eller injiceres subkutant.

Dyrene anbringes i 19 timer i plastcylindre med en indre diameter på 45 mm, der lukkes i begge ender af trådnet. Derefter ofringes dyrene i CO ₂ anæstesi. Underlivet åbnes og en ligatur er placeret rundt om spiserøret tæt på membranen.

Maven fjernes, og indholdet drænes i et centrifugerør. Langs den større krumning åbnes maven og fastgøres på en korkplade. Slimhinden undersøges med et stereomikro-anvendelsesområde. I rotten danner de øverste to femtedele af maven sæden med pladepitel og har små beskyttelsesmekanismer mod den ætsende virkning af mavesaften.

Under en begrænsende højderyg, i den glandulære del af maven, er de beskyttende mekanismer bedre i slimhinde i mediet to femtedele af maven end i den nederste del, hvilket danner antrummet.

Derfor forekommer læsioner hovedsageligt i vommen og i antrummet. Antallet af sår noteres, og sværhedsgraden registreres med følgende scorer:

. 0 = intet sår

. 1 = overfladiske sår

. 2 = dybe sår

. 3 = perforering.

Mængden af ​​mavindholdet måles. Efter centrifugering bestemmes surhedsgrad ved titrering med 0, 1 n NaOH.

Evaluering:

Et ulcerindeks UI beregnes:

UI = UN + US + UP x 10-1

jeg. UN = gennemsnit af antal sår pr. Dyr

ii. US = gennemsnit af sværhedsgrad

iii. UP = procentdel af dyr med sår

Ulcerindeks og surhed af maveindholdet i behandlede dyr sammenlignes med kontroller. Ved anvendelse af forskellige doser kan dosis-responskurver etableres for dannelse af mavesår og mavesyreafsöndring. ID50 værdier kan beregnes ved sandsynlighed analyse, hvor 0% svarer til nej og 100% til maksimal stimuleret mavesyre output.

Stressår ved immobiliseringsspænding:

Der anvendes grupper af 10 kvindelige rotter i rotter pr. Dosis af forsøgsmedicin og til kontroller med en vægt på 150-170 g. Fødevarer og vand trækkes tilbage 24 timer før forsøget. Efter oral eller subkutan indgivelse af testforbindelsen eller placeboopløsningen bliver dyrene bedøvet lidt med ether.

Både under- og øvre ekstremiteter fastgøres sammen, og dyrene vikles i trådblæsning. De suspenderes vandret i mørke ved 20 ° C i 24 timer og aflives til sidst i CO ₂ -bedøvelse. Maven fjernes, fastgøres på en korkplade, og antallet og sværhedsgraden af ​​sår registreres med et stereomikroskop ved anvendelse af følgende scorer:

.0 = intet sår

.1 = overfladiske sår

.2 = dybe sår.

.3 = perforering

Evaluering

Et ulcerindeks UI beregnes:

UI = UN + US + UP x 10-1

UN - gennemsnit af antal sår pr. Dyr.

US = gennemsnit af sværhedsgrad.

UP - procentdel af dyr med sår