Koagulasetest på bakterier for at finde ud af deres evner at koagulere blod (med figur)

Coagulasetest på bakterier for at finde ud af deres evner til at koagulere blod (med figur)!

Princip:

De patogene stammer af bakterierne Staphylococcus indeholder enzymkoagulasen, som virker inden for værtsvæv til at omdanne fibrinogen til fibrin.

Det fibrinnetværk, der dannes, omgiver bakteriecellerne eller de inficerede væv, hvilket beskytter bakterierne mod ikke-specifikke værtsmodstandsmekanismer, såsom fagocytose og anti-stafylokokaktiviteten i det normale serum.

Dette enzym hjælper også i blodets koagulation i værten ved at være en forløber for det trombinlignende stof, der koagulerer eller koagulerer blod. Koagulasetesten udføres for at skelne mellem koagulase-positiv (patogen eller virulent)) og koagulase-negativ (ikke-patogen eller avirulent) Staphylococcus.

I koagulasetesten blandes en suspension af testarten af Staphylococcus med blodplasma, og det inokulerede plasma undersøges derefter regelmæssigt for fibrindannelse eller koagulation.

Clotdannelse inden for fire timer tolkes som et positivt resultat og indikerer en virulent (patogen) Staphylococcus stamme. Fraværet af koagulation efter 24 timers inkubation er et negativt resultat, hvilket tyder på en virulent (ikke-patogen) stamme.

Materialer krævet:

Laboratoriedyr (kanin eller marsvin), sprøjte, antikoagulerende middel (natriumcitrat eller heparin), blodopsamlingsrør, centrifuge, reagensglas, dias, inokuleringssløjfe, bunsenbrænder, laminært strømningskammer, kassér krukke, isolerede kolonier eller rene bakteriekulturer af slægten Staphylococcus.

Procedure:

1. Sprøjten og blodopsamlingsrørene vaskes med opløsning af natriumcitrat eller heparin for at forhindre koagulering af blod umiddelbart efter indsamling (figur 7.24).

2. Ved hjælp af sprøjten samles blod fra forsøgsdyr som kanin eller marsvin og sættes ind i opsamlingsrørene.

3. Blodet centrifugeres ved 3000 rpm i 15 minutter i en centrifuge.

4. Supernatanten (plasma) opsamles i et andet citreret testrør og resten (blodceller) kasseres.

(a) Slide Metode:

1. To dråber af en suspension af testbakterierne, der tilhører slægten Staphylococcus, sættes på to lige adskilte halvdele af et objektglas ved hjælp af en inokuleringssløjfe. En dråbe bruges som 'kontrol' for at se om bakterierne selv er i klumper, og det andet dråbe bruges som 'test'.

2. Til 'testfaldet' tilsættes en dråbe opsamlet plasma, blandes og inkuberes ved stuetemperatur.

3. Dråberne observeres med mellemrum på op til 4 timer.

(b) Tube Metode:

1. Der tages to små reagensglas. Et reagensglas er mærket 'test' og den anden 'kontrol'. I hvert reagensglas tages 0, 5 ml af bakteriesuspensionen.

2. Til testrøret tilsættes 1 ml plasma, blandes og inkuberes

3. Rørene observeres med intervaller på op til 4 timer.