Catalase Test on Bacteria for at finde ud af deres evne til at nedbryde hydrogenperoxid (med figur)
Catalase Test on Bacteria for at finde ud af deres evne til at nedbryde hydrogenperoxid (med figur)!
Princip:
Nogle bakterier har evnen til at nedbryde hydrogenperoxid (H 2 0 2 ) til vand (H 2 O) og oxygen (0, ↑), da de kan producere enzymet 'catalase'.
Fordelingen af hydrogenperoxid ved katalase er indikeret af bobler af fri oxygengas (0, ↑).
I katalastesten sættes en loop af testbakterierne ind i en dråbe hydrogenperoxid taget på et objektglas. Hvis bakterien har evnen til at producere katalase, bryder den hydrogenperoxid (H 2 O 2 ) til vand og ilt. Produktion af ilt resulterer i boblende eller skummende, hvilket kan bemærkes i dråben.
Materialer krævet:
Slides, bibulous papir, inokuleringssløjfe, bunsenbrænder, laminært strømningskammer, hydrogenperoxid (3%), isolerede kolonier eller rene kulturer af bakterier.
Procedure:
1. Et objektglas rengøres under vandhanen (Figur 7.18).
2. Glideren tørres med bibulous papir og lufttørret.
3. En dråbe hydrogenperoxid (3%) tages i midten af diaset.
4. En sløjfe af testbakterierne tages aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ved hjælp af en flamme-steriliseret sløjfe og sættes i dråben hydrogenperoxid på glideren. Sløjfen steriliseres efter hver inokulation.
Observationer:
1. Boblende eller skummende forekommer i dråben: Catalase positiv.
2. Boblende eller skummende forekommer ikke i drop: Catalase negativ.
Forholdsregler:
En bakterie af bakterier fra blodagarmedium kan ikke anvendes til katalastest, da blod indeholder katalase og det giver altid positivt resultat. Katalase negative bakterier har tendens til at dø i sukkerfrie medier, enten fordi de producerer H 2 0 2 eller fordi H 2 0 2 akkumuleres i medierne, når de udsættes for luft og lys.
Derfor bør lagerkulturer af sådanne bakterier opbevares i mørke, og hvor adgangen til luft er begrænset. Catalase findes i næsten alle bakterier, der kan vokse aerobt. Da enzymet kun produceres af levedygtige bakterier, kan kulturer over 24 timer ikke anvendes til katalastest.
