Teknikker anvendt i Human Genome Project

Nogle af de vigtige teknikker, der anvendes i det menneskelige genomprojekt, er som følger:

(a) DNA-sekventering er sekventeringsmetoderne til bestemmelse af rækkefølgen af ​​nukleotidbase-adenin, guanin, cytosin og thymin i et DNA-molekyle. Der er to fælles metoder, nemlig Maxam Gilbert teknik, der bruger kemikalier til at spalte DNA i fragmenter på specifikke baser; eller mest Sanger-teknikken.

Det kaldes også di-deoxy eller kæde-termineringsmetoden. Den anvender DNA-polymerase til at fremstille nye DNA-kæder i nærværelse af di-deoxynucleotider kæde terminatorer for at stoppe kæden tilfældigt, når den vokser. I begge tilfælde separeres DNA-fragmenterne i overensstemmelse med længden ved polyacrylamidgelelektroforese. Dette gør det muligt at læse sekvensen direkte fra gelen.

(b) Beskæftigelse af Restriktion Fragment-Længde Polymorphisms (RFLP).

(c) Gær-kunstige kromosomer (YAC) er en vektor (bærer), der er oprettet og anvendt i laboratoriet for at klone stykker af DNA. En YAC er konstrueret ud fra de telomeriske, centromere og replikationsoprinsekvenser, der er nødvendige til replikation i gærceller. Telomeren er slutningen af ​​kromosomet; centromeren er kromosomområdet, hvortil spindelfibrene vedhæftes under celledeling; og replikationsoprinnelsessekvenserne er de steder, hvor replikationen af ​​DNA starter.

(d) Bakterielle kunstige kromosomer (BAC) er et stort segment af DNA (100.000-200.000 bp) fra en anden art klonet i bakterier. Efter at det fremmede DNA er blevet klonet ind i værtsbakterierne, kan mange kopier af det fremstilles. Det er en stor indsatskloningsvektor, der er i stand til at håndtere store segmenter af klonet DNA, typisk omkring 150 kb. BAC'er kan formeres i laboratoriestammer af Escherichia coli. Disse vektorer er nyttige i opbygningen af ​​genomiske biblioteker til genomskala-sekventeringsprojekter.

(e) Polymerase Chain Reaction (PCR).

(f) elektroforese.