Phenylalanin deaminiser test på bakterier for at finde ud af deres evne til at deaminere aminosyren (med figur)

Læs denne artikel for at lære om phenylalanin deaminiser testen på bakterier for at finde ud af deres evne til at deaminere aminosyren!

Princip:

Nogle bakterier har evnen til at deaminere aminosyren phenylalanin, da de kan producere enzymet 'phenylalanin deaminase'.

Dette enzym deaminerer phenylalanin ved at fjerne aminogruppen, hvorved der produceres phenylpyruvinsyre (en keto-syre) og ammoniak (NH3). Phenylpyruvsyre danner grøn farve med jernchloridopløsning.

I phenylalanin-deaminase-testen dyrkes testbakterien på agar-skæl, der indeholder phenylalanin. Hvis bakterierne har evnen til at deaminere phenylalanin, ændres skygternes farve fra gul til grønt, når der slippes ferricchloridopløsning på den.

Materialer krævet:

Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringssløjfe, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, kassér krukke, inkubator, phenylalaninagar, ferrikloridopløsning (10%), isolerede kolonier eller rene bakteriekulturer.

Procedure:

1. Ingredienserne af phenylalaninagarmedium (indeholdende phenylalanin som hovedkomponenter) eller dets færdige pulver, der kræves til 100 ml af mediet, vejes og opløses i 100 ml destilleret vand i en 250 ml konisk kolbe ved omrystning og hvirvling ( Figur 7.17).

2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af en pH-papir eller pH-meter og justeres til 7, 2 ved anvendelse af 0, 1 N HCI, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1 N NaOH, hvis det er mindre.

3. Kolben opvarmes for at opløse agaret i mediet fuldstændigt.

4. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand i 5 reagensglas (ca. 20 ml hver).

5. Testrørene er bomuldstoppede, dækket af håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.

6. De steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Efter sterilisering fjernes de fra autoklaven og holdes i en skrånende position for at afkøle og størkne mediet for at få phenylalanin-agar-skråninger.

8. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ved at strikke på overfladen af skråningerne ved hjælp af en flamme-steriliseret sløjfe. Sløjfen steriliseres efter hver inokulation.

9. De podede slanger inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i en inkubator.

10. 4-5 dråber ferricchloridopløsning (10%) tilsættes til hver skråning.