Metylrødtest for at finde ud af muligheden for at få bakterier til at udnytte glukose (med figur)
Læs denne artikel for at lære om den methylrøde test (MR-test) for at finde ud af, hvorvidt en bakterie kan bruge glukose med produktionen af en stabil syre som slutproduktet!
Princip:
Nogle bakterier har evnen til at udnytte glukose og omdanne den til en stabil syre som mælkesyre, eddikesyre eller myresyre som slutproduktet.
Disse bakterier metaboliserer indledningsvis glucose til pyruvinsyre, som yderligere metaboliseres gennem den 'blandede syrevej for at fremstille den stabile syre.
Den producerede syre varierer fra art til art og afhænger af de specifikke enzymatiske veje, der findes i bakterierne. Den således producerede syre nedsætter pH til 4, 5 eller derunder, hvilket er indikeret ved en ændring i farven på methylrød fra gul til rød.
I den methylrøde test (MR-test) dyrkes testbakterierne i et bouillonmedium indeholdende glucose. Hvis bakterierne har evnen til at udnytte glukose med produktion af en stabil syre, ændres methylrødens farve fra gul til rød, når den tilsættes i bouillonkulturen.
Materialer krævet:
Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringssløjfe, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, kassér krukke, inkubator, MR-VP bouillon (methylrød-Voges Proskauer bouillon eller glucose phosphat bouillon), methylrød opløsning, isolerede kolonier eller rene kulturer af bakterier.
Procedure:
1. Ingredienserne i MR-VP-bouillonmedium (indeholdende glucose som hovedkomponent) eller dets færdige pulver, der kræves til 100 ml bouillon, vejes og opløses i 100 ml destilleret vand i en 250 ml konisk kolbe ved omrystning og hvirvlende. MR-VP bouillon kaldes også glucose phosphat bouillon (figur 7.4).
2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af et pH-papir eller en pH-meter og justeres til 6, 9 ved anvendelse af 0, 1 N HCI, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1 N NaOH, hvis det er mindre. Kolben opvarmes om nødvendigt for at opløse ingredienserne fuldstændigt.
3. Kødet distribueres i fem reagensglas (ca. 10 ml hver), bomuldsplugget, dækket med håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.
4. Brothørrørene steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.
5. Væskeslangene får lov at afkøles til stuetemperatur.
6. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i bouillon ved hjælp af en inokuleringssløjfe steriliseret over bunsenflammen. Sløjfen steriliseres efter hver inokulation.
7. De inokulerede bouillonrør inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i en inkubator.
8. Alkoholholdig opløsning af methylrød (3-4 dråber) sættes i hvert reagensglas.
Observationer:
1. Rød farve produceret: MR positiv (dvs. bakterierne har omdannet glucose til en stabil syre, som angivet ved omdannelse af methylrød fra gul til rød farve. Det indikerer blandet syrefermentering).
2. Rød farve ikke produceret: MR negativ (dvs. glukosen i mediet er ikke omdannet til en stabil syre. Dette indikerer butylenglycolgæring).
