Voges-Proskauer-eksperiment på bakterier for at finde deres evne til at udnytte glucose (med figur)

Læs denne artikel for at lære om Voges-Proskauer testen (VP test) på bakterier for at finde ud af deres evne til at udnytte glukose med produktionen af acetylmethylcarbinol!

Princip:

Nogle bakterier har evnen til at udnytte glukose og omdanne den til acetylmethylcarbinol (acetoin), som er et neutralt slutprodukt.

Disse bakterier metaboliserer initialt glucose til pyruvinsyre, der metaboliseres yderligere via metabolisk mellemprodukt eddikesyre til acetylmethylcarbinol (acetoin) og C02 via 'butylenglycol-banen'.

Acetylmethylcarbinol oxideres til diacetyl i nærvær af a-naphthol under alkalisk tilstand (40% KOH). Diacetyl reagerer med guanidin-gruppen af kreatin (fra pepton anvendt i dyrkningsmediet) for at producere rosenrosa farve.

I Voges-Proskauer-testen (VP-test) dyrkes testbakterierne i et bouillonmedium indeholdende glucose. Hvis bakterierne har evnen til at udnytte glucose med produktion af acetylmethylcarbinol (acetoin) som det neutrale endeprodukt, opkøber bouillon en rosenrosen farve efter tilsætning af a-naphtholopløsning efterfulgt af 40% KOH.

Materialer krævet:

Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringssløjfe, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, kassettekande, inkubator, MR-VP-bouillon (eller glucosephosphat bouillon), VP-opløsning I (Barritt's reagensopløsning A) og VP-opløsning II (Barritt's reagensopløsning B), isolerede kolonier eller rene kulturer af bakterier.

Procedure:

1. Ingredienserne i MR-VP-bouillonmedium (indeholdende glucose som hovedkomponent) eller dets færdige pulver, der kræves til 100 ml bouillon, vejes og opløses i 100 ml destilleret vand i en 250 ml konisk kolbe ved omrystning og hvirvlende (figur 7.5). Den bouillon, der anvendes til methylrødtest, kan også bruges her. Normalt anvendes den samme bouillon til både testene (MR og VP) på samme tid.

2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af et pH-papir eller en pH-meter og justeres til 6, 9 ved anvendelse af 0, 1 N HCI, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1 N NaOH, hvis det er mindre. Kolben opvarmes om nødvendigt for at opløse ingredienserne fuldstændigt.

3. Kødet distribueres i fem reagensglas (ca. 10 ml hver), bomuldsplugget, dækket med håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.

4. Brothørrørene steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.

5. Væskeslangene får lov at afkøles til stuetemperatur.

6. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i bouillon ved hjælp af en inokuleringssløjfe steriliseret over bunsenflammen. Sløjfen steriliseres efter hver inokulation.

7. De podede bouillonrør inkuberes ved 37 ° C i 48 til 72 timer i en inkubator.

8. VP-opløsning I (indeholdende a-naphthol) sættes ned i bouillonrørene (0, 2 ml hver) og blandes grundigt.

9. VP-opløsning II (indeholdende KOH) sættes i bouillonørene (0, 6 ml hver), blandes grundigt og får lov at henstå i 30 minutter til 2 timer.