Urease Test på bakterier for at finde ud af deres evne til at hydrolyse urinstof (med figur)

Urease Test på bakterier for at finde ud af deres evne til at hydrolyse urinstof (med figur)!

Princip:

Nogle bakterier har evnen til at hydrolyse (nedbrydning i nærværelse af vand) urinstof til NH3 og CO2, da de kan producere enzymet 'urease'.

NH3 er alkalisk (basisk), på grund af hvilken det øger pH-værdien, der ændrer farven af ​​phenolrød fra gul til pink.

I ureasetesten dyrkes testbakterierne på agar-skæl, der indeholder urinstof og phenolrød. Hvis bakterierne har evnen til at hydrolyse urinstof, ændres mediefarven fra gul til lyserød. Nogle bakterier kan producere NH3 ved at bryde ned peptonerne i mediet. I sådanne tilfælde opnås falsk positivt resultat.

Materialer krævet:

Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringsnål, autoklave, bunsenbrænder, laminært strømningskammer, kassér krukke, inkubator, membranfiltreringsapparat, urinstofagar, isolerede kolonier eller rene kulturer af bakterier.

Procedure:

1. Fem testrør er bomuldsplugget, dækket af håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd (figur 7.15).

2. Indholdet af urinstofagarmedium (indeholdende urea som hovedkomponent) eller dets færdige pulver (undtagen urea), der kræves til 100 ml af mediet, vejes og opløses i 90 ml destilleret vand i en 250 ml konisk kolbe med ryster og hvirvler.

3. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af et pH-papir eller en pH-meter og justeres til 6, 9 ved anvendelse af 0, 1 N HCI, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1 N NaOH, hvis det er mindre.

4. Kolben opvarmes for at opløse agaret i mediet fuldstændigt.

5. Kolben er bomuldsplugget, dækket af håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.

6. De fem reagensglas og den koniske kolbe indeholdende urinstofagar (undtagen urea) steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Efter sterilisering fjernes de fra autoklaven og får lov at afkøle i nogen tid uden at lade mediet størkne. Køling af mediet forhindrer kondensering og akkumulering af vanddråber på skråningerne. Hvis mediet allerede er blevet tilberedt og størknet under opbevaring, skal det være flydende ved opvarmning forsigtigt, indtil det smelter fuldstændigt.

8. 20% urinstofopløsning fremstilles ved at opløse 20 gram urinstof i 100 ml destilleret vand og steriliseres ved membranfiltreringsapparat, fordi urinstof ikke kan steriliseres ved varme, da det nedbrydes ved opvarmning.

9. 10 ml af den steriliserede urinstofopløsning blandes aseptisk grundigt med 90 ml af det steriliserede afkølede kondenserede medium (kondenseret ved opvarmning).

10. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand aseptisk i de 5 bomuldsstoppede steriliserede reagensglas (ca. 20 ml hver).

11. Prøvørrørene holdes i en skrå stilling for at afkøle og størkne mediet for at opnå urea-agar-skråninger.

12. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i skråningerne ved at stikke ind i rækken og striber på overfladen af ​​skråningerne ved hjælp af en flamsteriliseret nål. Nålen steriliseres efter hver inokulation.

13. De podede slanger inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i en inkubator.

Observationer:

1. Lyserød farve produceret: Urease positiv.

2. Lyserød farve ikke produceret: Urease negativ.