Triple Sugar Iron Test på bakterier for at finde ud af evnen til at producere hydrogen sulfid (med figur)
Læs denne artikel for at lære om det tredobbelte sukkerjernstest på bakterier for at finde ud af evnen til at producere brintsulfid!
Målet er at udføre trippel sukkerjernstest (TSI test) for at finde ud af en bakteriers evne til at udnytte et eller flere af de tre sukkerarter, såsom glucose, saccharose og lactose samt dets evne til at producere hydrogensulfid (H 2 S), hvilket reducerer jern.
Princip:
Nogle bakterier har evnen til at udnytte et eller flere af de tre sukkerarter, såsom glucose, saccharose og lactose.
Hvis et eller flere af de tre sukkerarter (triple sukkerarter) anvendes, produceres der syre, hvilket reducerer pH, der ændrer farven af phenolrød fra rød til gul.
Desuden har nogle bakterier evnen til at producere hydrogensulfid (H 2 S) ved at anvende svovlforbindelser. Den således producerede H 2 S kombinerer med jernforbindelsen, jernsulfat, for at danne sorte bundfald af jernsulfid.
I den tredobbelte sukkerjernstest (TSI-test) dyrkes testbakterierne på agarskrævler indeholdende glucose, saccharose, lactose, phenolrød, natriumthiosulfat og jernsulfat. Medens mediet indeholder glucose (dvs. D-glucose eller dextrose) ved en lav koncentration på 0, 1%, holdes koncentrationen af saccharose og lactose højt ved 1%.
Hvis bakterierne har evnen til at udnytte et eller flere af de tre sukkerarter, ændres mediefarven fra rød til gul. Hvis bakterierne har evnen til at producere H 2 S, får mediet en sort farve. Da der anvendes tre sukkerarter og en jernforbindelse i mediet, kaldes testen tredobbelt sukkerjernstest.
Materialer krævet:
Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringsnål, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, kassér krukke, inkubator, triple sukkerjern (TSI) agar, isolerede kolonier eller rene bakteriekulturer.
Procedure:
1. Ingredienserne i TSI agar medium (indeholdende 3 sukkerarter og jern som hovedkomponenter) eller dets færdige pulver, der kræves til 100 ml af mediet, vejes og opløses i 100 ml destilleret vand i en 250 ml konisk kolbe ved ryster og hvirvler (Figur 7.7).
2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af et pH-papir eller en pH-meter og justeres til 7, 4 ved anvendelse af 0, 1 N HCI, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1 N NaOH, hvis det er mindre.
3. Kolben opvarmes for at opløse agaret i mediet fuldstændigt.
4. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand i 5 reagensglas (ca. 20 ml hver).
5. Testrørene er bomuldstoppede, dækket af håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.
6. De steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.
7. Efter sterilisering fjernes de fra autoklaven og holdes i en skrå position for at afkøle og størkne mediet for at få TSI-agar-skråninger.
8. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i skråningerne ved at stikke ind i rækken og striber på overfladen af skråningerne ved hjælp af en flamsteriliseret nål. Nålen steriliseres efter hver inokulation.
9. De podede slanger inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i en inkubator.
Observationer:
1. Gul rødt og rødt skrå med eller uden gasproduktion (pauser i agarbukken):
Syrestam og alkalisk skråning er blevet dannet. Her er kun glukose blevet anvendt anaerobt (fermentativt) for at gøre butt syren (gul). Intet andet sukker er blevet brugt. Da koncentrationen af glucose er mindre (0, 1%), oxideres den lille mængde syre, der produceres på den skrånende overflade, hurtigt og gør den alkalisk (rød).
Endvidere producerer oxidativ dominans af pepton, der er til stede i mediet, NHY, som gør den skrå alkaliske (rød). Imidlertid opretholdes syrebetingelsen i ryggen på grund af reduceret tilgængelighed af oxygen og langsommere vækst af bakterierne. Således er bakterierne glucose positive.
2. Gul stød og gul skråning med eller uden gasproduktion:
Syrestam og syrehældning er blevet dannet. Her er lactose og / eller saccharose blevet fermenteret. Da deres koncentration i mediet er høj, producerer de store mængder syrer, der resulterer i sur skrå og sur stød og opretholder den sure tilstand. Således er bakterierne saccharose / lactosepositiv.
3. Rød rump og rød skråning:
Ingen af de tre sukkerarter er blevet fermenteret. I stedet er peptoner blevet kataboliseret under anaerobe og / eller aerobiske forhold, hvilket resulterer i en alkalisk tilstand på grund af ammoniakproduktion.
Hvis kun aerob nedbrydning af peptoner forekommer, bliver kun den skrå overflade alkalisk (rød). Hvis der er aerobe og anaerobe nedbrydning af pepton, bliver både skrå og rødt alkalisk (rød). Således er bakterierne sukker negative.
4. Sortning af Butt:
Ud over en hvilken som helst af de ovennævnte betingelser, hvis der forekommer sværening af butt, indikerer det, at bakterierne er i stand til at producere H2S ved anvendelse af det uorganiske svovl (natriumthiosulfat), der er til stede i mediet.
H 2 S kombinerer med jernsulfatet i mediet for at danne sorte bundfald af jernholdigt sulfid, hvilket medfører en ændring i farven af mediet til sort. Således er bakterierne H2S-positive.
5. Ingen blackening af butt:
Bakterierne er ikke i stand til at producere H2S ved anvendelse af det uorganiske svovl (natriumthiosulfat), der er til stede i mediet. Således er bakterierne H2S-negative.
