Studie noter om Advance Flow Cytometry
Den nedenfor nævnte artikel indeholder studieanvisninger om forudgående flowcytometri.
Flowcytometri er den seneste teknik, der er udviklet i løbet af de sidste to årtier for at studere celleindholdet, især nuklearpakningseffektivitet. Ud over NPE kunne de fysiske og kemiske egenskaber ved indholdet af de forskellige celler og patologiske tilstande analyseres hurtigt med korrekt konklusion.
Flowcytometrene er tilgængelige på markedet i form af en maskine. Maskinen består af væskesystem, et optisk system til indsamling af lyssignaler, der genereres som celler, der passerer gennem laseren. Maskinen er også forsynet med et elektronisk system, der konverterer lyssignalerne til proportional elektroniske signaler, der i sidste ende digitaliseres til computeranalyse.
Ca. 5000 celler pr. Sekund, der måles individuelt efter hinanden, fra suspensionen af heterogen population kunne scannes.
Det sofistikerede Fludics System er udstyret med lasere, optik, elektronik og sortering. Fludics-systemet har fluorescensaktiveret cellesorter (FACS Calibur-væskesystem), under sorteringen kan det sortere nøjagtigheden af enkeltceller.
Resultatet er høj renhed med genopretning, der falder mellem enkeltcelle og genopretning. Det er elektronisk styret med tre knapper for at vælge PRIME, STAND BY og RUN driftsfunktion. Satsen er kontroller som Høj; (60 μl / min.), Medium (35 μl / min) og lavt (12 μl / min).
Excitering og emission, fluorokrom, filtre og farvekompensation er den vigtige del af udstyret. 530/30 BP filter måler signaler udsendt af fluorescens isothiocyanat (Stain). Hvis der anvendes phycoerythrin og popidiumiodid, anvendes 585/42 BP-filter. 650 LP filtre anvendes, hvis Peridinin Chlorophyll og 7-Amino-Actinomycin D Signal genereres.
Lasersignalerne læses af Becton Dickinson cellesøgningssoftware. Florescent detektor og båndfiltre skal justeres efter instruktion og krav til instrumentet. 488 nm Argon laser lyskilder og 623 nm båndpasfilter er almindeligvis til stede i udstyr.
Det har også system til at vise data og analyse. De vigtige parametre er histogrammer, multiparameterdata og listemodedata og gating. Maskinanalysen af dataene ved hjælp af software og giver histogrammer af DNA-indholdet versus tæller, som automatisk vises på computeren (49.2).
Anvendelserne af flowcytometer er talrige og er en velsignelse for biologisk forskning og for de kliniske undersøgelser i mange menneskelige sygdomme. Flowcytometer anvendes til undersøgelse af blodafstamninger i det hæmopoideiske væv i hovedcellerne i luftpustende fisk.
Det kan være let at skelne mellem den pluripotente hæmatopoietiske stamcelle og fænotype af den modne funktionelle perifere lymfocytpopulation. Den væsentlige anvendelse af dette udstyr er at studere apoptosen eller celledød og også at studere nekrose af cellen på grund af pesticid toksicitet.
På grund af vidvinkel scatter-signaler er det muligt at løse lymfocytter, monocytter og granulocytter fra lyseret helblodprøve. Det er også muligt at adskille blodplader fra baggrundsstøj. Det bruges til immunsystem og i immunophenotyping. Det bruges til at studere leukæmi- og lymfom-, transplantationsforskning, reticulocyt-opregning og analyse af cellulært DNA-indhold.
På grund af pulsbehandlingsmekanismen er det fordelagtigt i DNA-cellecyklusanalyse. NPE-analyse anvendes til at differentiere primær brystkræft og metastase, primær colon cancer og kolonmetastase såvel som gastrisk og ovariecancer (figur 49.2).
Den anvendte protokol er, at de første celler blev fjernet og fikseret i 3% paraformaldehyd. De permeabiliseres med 0, 5% Triton x 100. Det nukleare DNA blev derefter mærket med popidiumiodid efter RNase-behandling under anvendelse af Test Plus DNA-kit med cyklus.
