Forberedelse af våde bakteriebakterier for at observere dens naturlige form og størrelse

Målet er at forberede vådmontering af en bakterie til at observere sin naturlige form, størrelse og arrangement i levende tilstand.

Formål:

Bakterieceller kan ses let og tydeligt, når de farves af pletter, men i de fleste farvningsprocesser dør og taber cellerne deres naturlige form og størrelse på grund af varmefiksering såvel som på grund af eksponering for kemikalier (pletter, syre og alkohol).

Formålet med dette forsøg er at observere den naturlige form, størrelse og arrangement af bakterier i levende tilstand. Motilitet kan ikke observeres i vådmontering, da cellerne presses mellem glideren og dækslet.

Princip:

I vådmontering placeres en dråbe af bakteriesuspensionen på et dias, der er dækket af et dækslip og observeret under et sammensat mikroskop eller fortrinsvis under et mørkfelt- eller fasekontrastmikroskop ved anvendelse af olieinddrivningsmål.

Materialer krævet:

Glasglass, dækslip, petroleumgel, nedsænket olie (cedertørolie eller flydende paraffin), bakteriekultur (på fast medium eller i flydende suspension), sløjfe og mikroskop (sammensatte, mørkfelt eller fasekontrast).

Procedure:

1. Et objektglas rengøres ordentligt under ledningsvand, således at vand ikke forbliver som dråber på overfladen (Figur 5.2).

2. Glideren tørres ved at tørre med bibulous papir og derefter flytte over flamme eller holde i solen.

3. Hvis bakterierne er blevet dyrket på et fast medium (som skrå kultur eller plantekultur), sættes en dråbe destilleret vand i midten af glideren. En sløjfe steriliseres ved at opvarme den over en flamme til rødt varmt. Det afkøles til stuetemperatur. Derefter scrapes aseptisk en lille del af bakteriekulturen af sløjfen og overføres til dråben vand.

En suspension af bakterier er lavet ved forsigtigt at blande bakterierne i vandfaldet, således at dråben ikke spredes. Hvis det vokser i et flydende medium som suspension, placeres aseptisk en dråbe af bakteriesuspensionen i midten af diaset direkte ved anvendelse af en flamme-steriliseret sløjfe.

4. Der anvendes petroleumgel eller lignende materiale omkring dråben, så når afdækningen dækker dråbet minimeres fordampning og virkning af luftstrømmen.

5. Et dækslip holdes i skrå position nær dråbe bakteriesuspension med en kant, der berører glideren.

6. Sæt forsigtigt dækslet, indtil det berører overfladen af dråben.

7. Derefter frigøres dækslet, så dråben af bakteriesuspension spredes i alle retninger under dækslet. Pas på, så der ikke dannes nogen luftboble i suspensionen.

8. Slidsen er klipet på scenen af et sammensat mikroskop og observeret ved brug af lav effekt og højt tørt mål. Derefter lægges en dråbe neddypningsolie på dækslet og observeres ved hjælp af oliefremmende mål for mikroskopet. Fortrinsvis bør et fase-kontrast eller mørkfeltmikroskop anvendes til klar observation.