Hydrogen leveret test på bakterier for at finde ud af deres evne til at producere hydrogen (med figur)

Læs denne artikel for at lære om den hydrogenleverede test på bakterier for at finde ud af deres evne til at producere hydrogen!

Princip:

Nogle bakterier har evnen til at reducere svovl til hydrogensulfid. Det er en farveløs gas, som reagerer med jern (jernholdige salte) til dannelse af sorte bundfald af jernsulfid.

Det reagerer også med blyacetat til dannelse af sorte bundfald af blysulfid. Hydrogen sulfid test (H, S test) kan udføres på to måder baseret på svovlkilden.

De er som følger:

(jeg) H ₂ S-test ved anvendelse af uorganisk svovlkilde

(Ii) H ₂ S test ved anvendelse af organisk svovlkilde

(i) H ₂ S-test ved anvendelse af uorganisk svovlkilde:

I denne test dyrkes testbakterierne på triple sukkerjern-agar-slanger (TSI-agar-slanger), som indeholder glucose, saccharose, lactose, phenolrød, natriumthiosulfat og jernsulfat. Hvis bakterierne anvender det uorganiske svovl (natriumthiosulfat), der anvendes i mediet, fremstilles H ₂ S, som kombinerer med jernsulfatet i mediet for at danne sorte bundfald af jernsulfid, hvilket medfører en forandring i rumpens farve til sort .

Udover at anvende uorganisk svovl, hvis bakterierne kan anvende nogen af de tre sukkerarter (glucose, saccharose eller lactose), fremstilles syre, hvilket reducerer mediumets pH. Som følge heraf ændres skråets farve fra rød til gul.

Materialer krævet:

Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringsnål, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, kassér krukke, inkubator, isolerede kolonier med tredobbelt sukkerjerns agar eller rene bakteriekulturer.

Procedure:

1. Ingredienserne i TSI agar medium (indeholdende 3 sukkerarter og jern som hovedkomponenter) eller dets færdige pulver, der kræves til 100 ml af mediet, vejes og opløses i 100 ml destilleret vand i en 250 ml konisk kolbe ved ryster og hvirvler (figur 7.13).

2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af et pH-papir eller en pH-meter og justeres til 7, 4 ved anvendelse af 0, 1 N HCI, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1 N NaOH, hvis det er mindre.

3. Kolben opvarmes for at opløse agaret i mediet fuldstændigt.

4. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand i 5 reagensglas (ca. 20 ml hver).

5. Testrørene er bomuldstoppede, dækket af håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.

6. De steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Efter sterilisering fjernes de fra autoklaven og holdes i en skrå position for at afkøle og størkne mediet for at få TSI-agar-skråninger.

8. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i skråningerne ved at stikke ind i rækken og striber på overfladen af skråningerne ved hjælp af en flamsteriliseret nål. Nålen steriliseres efter hver inokulation.

9. De podede slanger inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i en inkubator.

Observationer:

1. Skiftets farve ændres til sort: H ₂ S positiv.

2. Buttens farve ændres ikke til sort: H ₂ S negativ.

(ii) H ₂ S-test ved anvendelse af organisk kilde til svovl

I denne test dyrkes testbakterierne i cystein-bouillon, som indeholder cystein som den organiske svovlkilde. Hvis bakterierne udnytter det organiske svovl (cystein), der anvendes i mediet ved hjælp af sit enzym 'cystein desulfurase', produceres H2S. Denne H ₂ S kombinerer med blyacetatet gennemblødt i et papir for at danne sorte bundfald af blysulfid, hvilket medfører en ændring i farven på papirstrimlen til sort.

Materialer krævet:

Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringssløjfe, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, disponér krukke, inkubator, cystein-bouillon, Whatman filterpapirstrimler, blyacetatopløsning (mættet), isolerede kolonier eller rene bakteriekulturer.

Procedure:

1. Ingredienserne i cystein-bouillonmedium (indeholdende cystein som hovedkomponent) eller dets færdige pulver, der kræves til 100 ml bouillon, vejes og opløses i 100 ml destilleret vand i en 250 ml konisk kolbe ved omrystning og hvirvling ( Figur 7.14).

2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af et pH-papir eller en pH-meter og justeres til 7, 5 ved anvendelse af 0, 1 N HCI, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1 N NaOH, hvis det er mindre. Kolben opvarmes om nødvendigt for at opløse ingredienserne fuldstændigt.

3. Kødet distribueres i fem reagensglas (ca. 10 ml hver), bomuldsplugget, dækket med håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.

4. Brothørrørene steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.

5. Væskeslangene får lov at afkøles til stuetemperatur.

6. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i bouillon ved hjælp af en inokuleringssløjfe steriliseret over bunsenflammen. Sløjfen steriliseres efter hver inokulation.

7. En lille stribe papir gennemblødt i blyacetatopløsning (mættet) fastgøres til mundingen af hvert reagensglas på en sådan måde, at en lang del af den forbliver inde i testrøret, og en lille del forbliver udenfor.

8. De podede bouillonrør inkuberes ved 37 ° C i 48 timer i en inkubator.