Hvordan man udfører kapsel-farvning af bakterier

Formålet med at udføre kapselfarvning af bakterier er at observere bakteriekapsel.

Formål:

I nogle bakterier er cellevæggen omgivet af en viskøs cellehylster kaldet 'kapsel'. Den er lavet af polysaccharid, glycoprotein eller polypeptid.

Når kapslen er for tynd til at blive observeret under lysmikroskop, kaldes det 'mikrokapsel', og når det er så tykt, at mange celler er indlejret i kapselmatrixen; det hedder 'slime'.

Baseret på tilstedeværelse eller fravær af kapsel er bakterier af to typer som følger:

(1) Kapslede bakterier:

En bakterie, som besidder kapsel, er en kapslet bakterie.

(2) Ikke-kapslede bakterier:

En bakterie, som ikke har kapsel, er en ikke-kapslet bakterie

Formålet med kapselfarvning er at observere bakteriekapsel ved at skelne mellem kapselmateriale fra bakteriecellen.

Princip:

Ved kapselfarvning laves der en smøring af bakterier i midten af et dias. Det er ikke varmefast, da cellekrympning forårsaget af opvarmning kan skabe en klar zone omkring cellen, hvilket kan forveksles som kapsel.

Da kapselmaterialet er vandopløseligt og kan vaskes væk med kraftig vask, anvendes kun to reagenser ved farvning uden nogen mellemliggende vandvaskning. Et af de to reagenser er den primære plet, krystalviolet. Det giver mørk lilla-blå farve til både cellen og kapslen.

Det absorberes imidlertid i cellen på grund af den ioniske natur af de cellulære komponenter, hvorimod den blot "klæber" til kapslen på grund af den ikke-ioniske karakter af kapselmaterialet. For at forhindre udskillelse af kapselmaterialet, er smedet ikke vandtvasket.

Det andet reagens, kobbersulfat virker både som et affarvningsmiddel og en modfarve. Det affarves ved at fjerne overskydende krystalviolet fra omkring cellerne såvel som krystalvioletten klæber til kapslen. Det modvirker også kapslen og giver en lyseblå farve til den. Kapslen vises nu lyseblå, mens cellen fremstår dyb lilla-blå.

Materialer krævet:

Slide, loop, nedsænkning olie, mikroskop, krystal violet plet, kobbersulfat løsning (20%).

Procedure:

1. Glideren rengøres ordentligt under ledningsvand, således at vand ikke forbliver som dråber på overfladen (Figur 5.14).

2. Det klæbende vand udslettes med bibulous papir og glideren lufttørres.

3. Et smear af bakterier fremstilles i midten af diaset i to metoder som følger.

(en) Hvis bakterier vokset på agarplade eller agarskråning skal observeres, sættes der en dråbe vand i midten af glideren, og en sløjfe af bakterier fra pladen eller skråningen overføres til den ved en sløjfe steriliseret over flammen. Derefter foretages en bakteriesuspension ved langsom rotation af sløjfen i dråben, og den spredes, indtil et smear opnås.

(B) Hvis bakterier vokset i flydende bouillon skal observeres, sættes en dråbe af bakteriesuspensionen direkte i midten af glideren ved hjælp af en flamme-steriliseret sløjfe, og der smøres ved at sprede sig.

4. Smøret er lufttørret. Der opnås ingen varmefiksering, da den resulterende cellekrympning kan skabe en klar zone omkring bakterierne, hvilket kan forveksles som kapsel.

5. Smøret er oversvømmet med den primære plet, krystalviolet, i 5-7 minutter.

6. Smøret vaskes med 20% kobbersulfatopløsning. For at forhindre udskillelse af kapselmaterialet, er smedet ikke vandtvasket.

7. Glideren blottet tørt med bibulous papir.

8. Glidestykket klippes til mikroskopets stadium og det smøre, der observeres under lavt og højt tørt mål.

9. En dråbe nedsænkningsolie sættes på smøret.

10. Smøret er observeret under olie-nedsænkningsmål.