Eksperiment: Motilitetstest af bakterier: ved at hænge dråbeforberedelse (med figur)

Formålet med at udføre motilitetstest af en bakterie, ved at hænge drop forberedelse, for at finde ud af om det er motile eller ikke-motile.

Formål:

Motilitet betyder bevægelsesevne ved egen kraft. Baseret på bevægelighed kan bakterier opdeles i to grupper som følger.

(1) Motile Bakterier:

En bakterie, som har den indre bevægelsesevne i det omgivende medium, hvor den forbliver suspenderet, er en bevægelig bakterie.

(2) Ikke-motile bakterier:

En bakterie, som ikke har den indre bevægelsesevne i det omgivende medium, hvor den forbliver suspenderet, er en ikke-motil bakterie. Ikke-motile bakterier kan vise tilsyneladende bevægelighed som følge af deres brune bevægelser forårsaget af bombardementet af vandmolekylerne i det omgivende medium på bakteriecellerne.

I våde monteringsforhold, selvom formen og størrelsen af bakterier kan observeres, kan motiliteten hæmmes, da suspensionen presses mellem glideren og dækslet. Det er derfor; hængende dråbeforberedelse eller motilitetstest udføres for klar observation af bakteriens motilitet udover deres form og størrelse. Det er nyttigt ved identifikation af bakterier.

Princip:

En meget lille dråbe bakteriesuspension hænges fra midten af et dækslip i hulrummet af et hulrumsrør. Den hængende dråbe observeres under et mikroskop ved hjælp af olie-nedsænkningsmål. Hvis bakterierne er motile, kan dets celler ses som uregelmæssig bevægelse i det omgivende medium.

I modsætning hertil forbliver cellerne, hvis de ikke er motile, statiske i mediet uden bevægelse eller kan vise brunisk bevægelse som følge af bombardementet af vandmolekylerne i mediet på bakteriecellerne.

Materialer krævet:

Hulskive, dækslip, vaselin eller vaselin, nedsænkning af olie, 24-timers gammel bouillonkultur af bakterier, sløjfe og mikroskop (sammensatte, mørkfelt eller fasekontrast).

Procedure:

1. Et hulrumsrør rengøres ordentligt under ledningsvand, således at vand ikke forbliver som dråber på overfladen. En hulrumsslid er et glasskinne med en lille runde depression i midten, hvor en lille dråbe bakteriesuspension kan hænge (figur 5.3).

2. Glideren tørres ved at tørre med bibulous papir og efterfølgende flytte det over flamme eller holde det i solen.

3. En ring af vaselin (eller vaselin) påføres rundt om hulrummet.

4. En sløjfe steriliseres over flammen og afkøles. En lapful af bakteriesuspension er taget fra den 24-timers gamle bouillonkultur aseptisk. En lille dråbe af suspensionen er placeret i midten af et dækslip. Kødet bør ikke være mere end 24 timer gammelt, fordi bakterier kan miste deres bevægelighed, da de bliver ældre.

5. Hulrummet er omvendt og anbragt på dækslet på en sådan måde, at hulrummet dækker dråbet.

6. Glideren og dækslet presses forsigtigt sammen, så hulrummet er forseglet. Pas på at se, at ingen del af hulrummet rører dropen.

7. Glideren er omvendt hurtigt, således at dråbet hænger ind i hulrummet uden at berøre det.

8. Slidsen er klippet til mikroskopets stadium.

9. Dråbens kant er fokuseret under lavt effektmål.

Årsagerne til at fokusere kanten af dråben er som følger:

(a) Bedre kontrast opnås på grund af forskel i brydningsindekset af dråben og dækglasset.

(b) Når dråben hænger, tynder den mod kanten, for hvilken kanten indeholder mindre antal bakterier, der skal observeres tydeligt for bevægelighed.

10. En dråbe nedsænkningsolie lægges på dækslet lige over det hængende dråbe, og kanten af det hængende dråbe observeres under mikro-nedsænkningsmål for mikroskopet. Fortrinsvis bør et fase-kontrast eller mørkfeltmikroskop anvendes til klar observation.

Observationer (Under Olieinddrivelsesmål):

1. Motilitet:

Motile eller ikke-motile

2. Form af bakterier:

Sfærisk (coccus)

Stangformede (baciller)

Komma-lignende (vibrio)

Spiral (spirochetes)

3. Arrangement af bakterier:

Par (diplobacillus / diplococcus)

I fours (tetrads)

I kæder (streptokokker / streptobacillus)

Drue-lignende klynger (staphylococcus)

Cuboidal (sarkin eller oktet).

4. Størrelse af bakterier:

Ved øjeoverslag gør du tegning af feltet under olieinddrivningsmål.

(3) Farvning:

Formål med farvning:

Brydningsindekset for bakterieceller ligger meget tæt på vandets, hvor de suspenderes under observation og også til glaspladen, som de observeres under mikroskop. Derfor er det meget svært at observere dem klart.

For at overvinde denne vanskelighed er cellerne farvet af pletter, der giver dyb farve til cellerne og lysfargen til det omgivende medium, hvori de suspenderes. De dybe farvede celler får en klar kontrast til den lysfarvede baggrund og kan observeres tydeligt.

Farvning er således en metode til at give farve til de ellers farveløse transparente mikroorganismer ved hjælp af forskellige biologiske farvestoffer kaldet "pletter" for deres mikroskopiske observation.

Kemi af pletter:

Farvestoffer er af tre typer som følger:

1. Farvestoffer:

De bruges til almindelig brugsfarve som f.eks. Til farvning af tekstilmaterialer og til farvning af vægge.

2. pletter:

De bruges til farvning af biologiske eller mikrobiologiske prøver. Disse er mere præcise og krævende.

3. Indikatorer:

De er kemikalier, som ændrer farve med ændring i hydrogenionkoncentration (pH).

Selvom "plet" er det passende udtryk, anvendes udtrykket "farvestof" bredt i mikrobiologi til at betyde farvestoffer. Tidligere blev naturlige farvestoffer fremstillet af forskellige planter. De er blevet meget erstattet af syntetiske farvestoffer.

Da det første syntetiske farvestof blev fremstillet ud fra anilin, kaldes alle syntetiske farvestoffer 'anilinfarvestoffer'. Imidlertid produceres de fleste af disse farvestoffer nu af kultet tjære, for hvilke de nu kaldes »kulteklærfarvestoffer«. Koltærfarfarerne er benzenderivater. Et farvestofmolekyle består af tre komponenter (figur 5.4) som angivet nedenfor.

(a) en benzenring

(b) En kromoforgruppe

Benzen er et organisk farveløst opløsningsmiddel, medens chromophoren er farvestoffet i farvestoffet. Benzen kombinerer med kromoforen for at danne kromogen (figur 5.5). Da kromogen ikke besidder ejendommen at dissociere, kan den ikke kombinere med cellerne og vaskes let væk.

Når et kromogen kombineres med et auxokrom, dannes et farvestof eller plet. Auxokromet overfører den elektrolytiske dissocieringsegenskab (saltdannende egenskab) til farvestoffet. Således defineres kemisk en plet som en organisk forbindelse indeholdende en benzenring, en chromoforgruppe og en auxochromgruppe.

Typer af farvning:

Farvning af bakterier er af forskellige typer som beskrevet nedenfor (figur 5.6).

I. Simple farvning:

Her anvendes kun en plet. Denne farvning bruges til at observere form (cocci, baciller, vibrio, spirilli) og arrangement (enkelt, par, tetrad, kæde, klynge) af bakterier.

Det er af to typer som følger:

A. Grundfarvning:

Ved basisk farvning anvendes en grundfarve, såsom methylenblåt, krystalviolet eller carbol fuchsin, til at plette bakteriecellerne. Pletten binder tæt til bakteriecellerne og giver en dyb farve af pletten til cellerne, mens det omgivende medium får en lysfarve af pletten.

B. Syrefarvning:

Ved sur farvning anvendes en sur plet, som eosin eller nigrosin, til at plette bakteriecellerne negativt. Pletten gør den omgivende farvet, mens bakteriecellen forbliver farveløs.

II. Differentiel farvning:

Her anvendes mere end en plet. Det udføres til følgende formål.

A. Adskillelse i grupper:

Disse differentielle farvningsmetoder udføres for at differentiere bakterier i forskellige grupper baseret på deres farvningsegenskaber.

Disse metoder omfatter følgende:

(en) Gramfarvning:

Denne farvningsmetode udføres for at differentiere mellem gram-positive og gram-negative bakterier.

(b) Acid-hurtig farvning:

Det udføres for at differentiere mellem syrefaste og ikke-sure-hurtige bakterier.

B. Visualisering af specifikke strukturer af bakterier:

Disse differentielle farvningsmetoder udføres for at visualisere specifikke strukturelle bestanddele af bakterieceller.

Disse metoder omfatter følgende: