Eksperiment til måling af mikroorganismernes størrelse under mikroskop (med figur)

Eksperiment til at måle størrelsen af mikroorganismer under mikroskop!

Formål:

Mikrometri (mikro: mikroskopisk, metri: måling) er måling af dimensioner af mikroskopiske genstande med hensyn til længde, bredde, diameter og tykkelse. Mikroorganismer er mikroskopiske objekter, da de ikke er synlige for blotte øje og kun kan observeres under mikroskop.

Meget ofte er det nødvendigt at måle deres dimensioner med hensyn til længde, bredde og diameter. På grund af deres minutstørrelse skal måling af deres dimensioner foretages under mikroskop. Formålet med mikrometri er således at måle mikroorganismernes dimensioner under mikroskop.

Princip:

Måling af mikroorganismernes dimensioner sker under mikroskop ved hjælp af to mikroskalaer kaldet 'mikrometre'. Begge mikrometre har mikroskopiske gradueringer ætset på deres overflader. En af dem, den 'okulære mikrometer' er en cirkulær glasskive, som passer ind i den cirkulære hylde inde i okularet.

Det har vilkårlige gradueringer ætset på overfladen. Imidlertid er afstanden mellem de ætsede gradueringer konstant for et bestemt okulært mikrometer. Den anden mikrometer, der hedder 'stage micrometer', er en speciel glasskinne, som er klipet til mikroskopets trin. Den har standardgraderinger ætset på overfladen, som er 10 μ fra hinanden.

Kalibrering:

Ved anvendelse af det krævede mål kalibreres gradueringerne på det okulære mikrometer mod standardgraderingerne på scenemikrometeret. Kalibrering er påkrævet, fordi afstanden mellem okulære gradueringer varierer afhængigt af det anvendte objekt, hvilket bestemmer størrelsen af feltet.

Til kalibrering overlejres begge mikrometer-ætsninger ved at rotere okularet. Antallet af okulære divisioner (OD), der falder sammen med antallet af trinafsnit (SD), er fundet ud af.

Herfra beregnes kalibreringsfaktoren for en okulær division (OD) som følger:

Hvis 10 OD falder sammen med 2 SD, så

10 OD = 2 SD = 2 x 10 μ = 20 μ (... 1 SD = 10 μ)

1 OD = 20/10 μ = 2 μ

Således er afstanden mellem to tilstødende okulære etsninger 2 μ (dvs. kalibreringsfaktoren er 2 μ).

Måling:

Efter kalibrering fjernes scenemikrometeret, og mikrobenet, hvis dimensioner skal måles, placeres på scenen på et objektglas og fokuseres. Nu tælles antallet af okulære divisioner, der optages af mikroorganismen. Ved at multiplicere dette antal divisioner med kalibreringsfaktoren bestemmes størrelsen af mikrobe således som følger.

Hvis mikroben indtager 6 OD i længden, så længden af mikroben = 6 x kalibreringsfaktor = 6 x 2 = 12 μ.

Det er muligt at måle størrelsen af mikrober ved direkte at observere dem på et trin mikrometer. Dette ville undgå kalibrering og beregninger. Men scene mikrometer er en standard skala, hvilket er dyrt på grund af mikroetsning på den. Hvis det bruges ofte til direkte observation, bliver dets ætsninger slidt væk.

Desuden er ætsningerne på scenemikrometeren mere vidt forskellede (ca. 10 gange) end dem på det okulære mikrometer. Dimensionerne kan således ikke præcist bestemmes med et trinmikrometer. Det er derfor; den bruges aldrig til direkte måling.

Materialer krævet:

Ocular mikrometer, trin mikrometer, dias, mikroskop, mikrobe.

Procedure:

1. Okularet fjernes fra mikroskopet, og dets øverste låg skrues af. Låget fjernes. Øjenlinsen (Figur 5.15) fjernes forsigtigt. Det okulære mikrometer (et cirkulært ætset glasstykke, der glider ind i øjenstykket) placeres omhyggeligt i okularet. Øjenlinsen er placeret tilbage, og det øverste låg er skruet til dets oprindelige tilstand. Okularet er placeret tilbage i mikroskopet.

2. Scenen mikrometer klippes til scenen og ætsningerne centreret ved at flytte det mekaniske trin.

3. Det lave effektmål er taget til position.

4. Okularet roteres indtil ætsningerne på begge mikrometre overlejres.

5. Det krævede mål er taget til stilling. Det krævede mål er, at ved hjælp af hvilken hele mikroorganismen kan ses, og den dækker det mikroskopiske felt i størst muligt omfang.

6. Med det krævede mål i position (til olieinddrivningsmål sættes en dråbe olie på scenemikrometeret), flyttes det mekaniske trin, således at en linje på scenemikrometeret falder sammen med en linje på det okulære mikrometer. Derefter søges en anden linje på det okulære mikrometer, som falder sammen med en anden linje på scenemikrometeret. Antallet af divisioner mellem de sammenfaldende linjer tælles for begge mikrometre.

7. Kalibreringsfaktoren for det anvendte objekt beregnes.

8. På samme måde beregnes kalibreringsfaktorer for de øvrige mål.

9. Scene mikrometer fjernes.

10. Slidsen, der indeholder den mikrobe, der skal observeres, placeres på scenen og fokuseres.

11. Antallet af okulære divisioner, der er dækket af mikroben, tælles ved at se igennem okularet.

12. Mikroorganismens størrelse bestemmes ved at multiplicere antallet af okulære divisioner dækket af mikrobeen med kalibreringsfaktoren.