Eksperiment til identifikation af ukendte bakterier (med figur)

Eksperiment til identifikation af ukendte bakterier!

Princip:

Identifikation af ukendte bakterier er et af de vigtigste ansvar for mikrobiologerne. Prøver af blod, væv, mad, vand og kosmetik undersøges dagligt i laboratorier over hele verden for tilstedeværelsen af ​​forurenende mikroorganismer.

Desuden screener industrielle organisationer konstant materialer til isolering af nye antibiotikaproducerende mikrober eller mikrober, der vil øge udbyttet af omsættelige produkter, såsom vitaminer, opløsningsmidler og enzymer. Når de er isoleret, skal disse ukendte mikrober identificeres og klassificeres.

Videnskaben om klassificering kaldes taxonomi og omhandler adskillelse af levende organismer i indbyrdes forbundne grupper. Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 8. udgave, er den officielle taksonomiske nøgle, der indeholder ordrer, familier, slægter og arter af alle kendte klassificerede bakterier (bilag III).

Med den grundlæggende viden i farvningsmetoder, isolationsteknikker, bakteriel ernæring, biokemiske aktiviteter og vækstegenskaber hos bakterier bliver det lettere at identificere eventuelle ukendte bakterier.

Karakteristika for få bakterier er angivet i tabel 7.2. Andre bakterier kan identificeres på en lignende måde baseret på observationer og resultater opnået efter forsøgsprocedurerne.

Materialer krævet:

Slides, hulrumsruter, petriskåle, koniske kolber, bomuldspropper, inokuleringssløjfe, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, kassettekasse, inkubator, næringsvæske, nærings agar, gramfarvningsreagenser, medier og reagenser til biokemiske test, sammensat mikroskop, isolerede kolonier eller rene kulturer af bakterier.

Procedure:

1. Gramfarvning af de ukendte bakterier udføres. Foruden gramfarvning registreres også dets morfologi og arrangement. Motilitetstest af bakterierne bestemmes ved hængende dråbeforberedelse (figur 7.25).

2. Ved anvendelse af steril inokuleringsteknik inokuleres bakterierne i to næringsstof-agarskærer, et næringsstofbouillonrør og til en nærings agarplade ved hjælp af streak-inokulation. Efter inkubering anvendes en skråkultur til at bestemme de ukendte bakteriers kulturelle egenskaber.

Det andet benyttes som en lagerunderkultur, hvis det skulle være nødvendigt at gentage nogen af ​​testene. Vækstkarakteristika observeres også i bouillonrøret og koloniegenskaberne på pladen.

3. Udøver pleje i steril teknik for ikke at forurene kulturer og derved opnå ukorrekte resultater, inokuleres bakterierne i respektive medium for at udføre de forskellige biokemiske test.

4. Inokulerede medier inkuberes ved de krævede temperaturer i de nødvendige længder af tid.

Observationer:

1. I gramfarvning registreres bortset fra gramreaktionen også bakteriens morfologi og arrangement.

2. De bakterielle kendetegn ved bakterierne i næringssubstans, på agarskråning og på næringsagar-plade er noteret.

3. Resultater af de biokemiske reaktioner registreres.

Fortolkning af resultater:

1. Ved hjælp af ovenstående registrerede data (for eksempel se tabel 7.1) og ved hjælp af Bergey's Manual of Determinative Bacteriology identificeres bakterierne for dets slægt og art. Det skal huske på, at resultaterne kan variere afhængigt af stammerne for hver art, der anvendes, og hvor lang tid bakterierne er blevet opretholdt i bestandenes kultur.

De observerede resultater kan ikke være helt identiske med de forventede resultater. Derfor vælges de bakterier, der bedst passer til resultaterne. De identificerende egenskaber ved få bakterier har givet i tabel 7.2.

2. Alternativt kan der ved hjælp af de ovennævnte data angives kodenumre for de registrerede resultater (se tabel 7.3), og bakterierne identificeres let ved hjælp af computerprogrammer til rådighed for Apple II, IBM PC eller TRS-80.

Programmet er designet til at identificere de ukendte bakterier på basis af procentdel af lighed mellem de ukendte bakterier og de kendte bakterier med hensyn til ovenstående observationer.

At starte programmet til Apple II eller IBM-PC:

(a) Disken indsættes i det venstre drev.

(b) Computeren er tændt.

(c) Programinstruktionerne følges ved at indtaste svarene, ukendte bakterienummer og kodenumre, da spørgsmålene vises på skærmen.

At starte programmet til TRS-80:

(en) Computeren er tændt.

(B) Disken er indsat i bunddrevet.

(C) Den orange knap trykkes.

(D) Når du bliver spurgt, indtastes "dato (MM / DD / YY)".

(E) Oransjeknappen trykkes igen.

(f) Programinstruktioner følges ved at indtaste svarene, ukendte bakterienummer og kodenumre, da spørgsmålene vises på skærmen.

E. Automatiserede metoder til identifikation af ukendte bakterier:

Identifikation af ukendte bakterier ved manuel metode ved brug af farvningsreaktioner, motilitetstest, kulturelle karakteristika og biokemiske test er en besværlig, langvarig og tidskrævende proces. For at gøre processen let og kort, er der udviklet automatiske metoder.

Disse metoder bruger i grunden de samme biokemiske test som anvendt i de manuelle metoder, men her udføres det automatisk, og fortolkningen sker med et computerstøttet program.

To sådanne systemer, der anvendes i øjeblikket til automatisk identifikation af bakterier, er givet som følger:

1. MINI API-system

2. VITEK 2 System

F. Yderligere bekræftelse:

(1) Serologiske test:

Serologiske test kan udføres for yderligere bekræftelse af de identificerede bakterier. Til en suspension af de identificerede bakterier (siger X) blandes en dråbe af antiserumet (anti-X) mod den pågældende bakterie. Hvis det resulterer i dannelse af klumper eller bundfald (X-anti-X-kompleks), bekræftes identifikationen.

Antisera for forskellige bakterier er kommercielt tilgængelig. De produceres kommercielt i forskellige laboratorier. Antiserum af bestemte bakterier fremstilles ved at injicere dræbte eller svækkede celler af disse bakterier (sig X) ind i et laboratoriedyr.

Som forsvarsmekanisme producerer værtsdyret antistoffer (anti-X) mod den bakterie, som forbliver i blodet. Blodet opsamles fra dette dyr og dets serum isoleres ved hjælp af særlige teknikker. Dette serum, der indeholder antistof mod den pågældende bakterie, kaldes antiserum af disse bakterier.

(2) PCR-test:

Polymerase Chain Reaction (PCR) testen er en hurtig molekylær metode til bekræftelse af de identificerede bakterier. Denne teknik bruges meget hurtigt til at påvise forskellige bakterier og vira hurtigt og præcist.