Eksperiment for at finde ud af bakteriens evne til at dekarboxylere forskellige aminosyrer (med figur)

Eksperiment for at finde ud af Bakteriers evne til at dekarboxylere forskellige aminosyrer!

Princip:

Nogle bakterier har evnen til at dekarboxylere forskellige aminosyrer til tilsvarende aminer og CO 2, da de kan producere respektive "aminosyre dekarboxylase" enzymer.

Blandt dem kan hver bakterie dekarboxylere kun nogle af aminosyrerne, mens den ikke kan dekarboxylere de andre.

Således kan aminosyrerne, som en bakterier kan decarboxylere og aminosyrerne, som det ikke kan karakteriseres af bakterierne. Aminosyredecarboxylase-testen udføres for særskilt at teste en bakteriers evne til at dekarboxylere aminosyrer som lysin, ornithin og argentin med produktion af CO 2 og respektive aminer som cadaverin, putrescin og agmatin.

Hvis bakterierne kan

dekarboxylerer en eller flere af aminosyrerne, der fremstilles respektive aminer, som er alkaliske (basale) og derfor øger pH-værdien, der ændrer farven af ​​bromocresol-lilla fra gul til lilla.

I aminosyredecarboxylase-testen dyrkes testbakterierne anaerobt i et bouillonmedium indeholdende glucose, bromocresolpurpur og en af ​​aminosyrerne. Farven af ​​bouillon ændrer sig oprindeligt fra lilla til gul på grund af faldet i pH som følge af syrerne frembragt ved fermentering af glucose. Hvis bakterierne har evnen til at dekarboxylere aminosyren, ændres bouillonens farve fra gul tilbage til lilla.

Materialer krævet:

Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringssløjfe, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, kassér krukke, inkubator, aminosyre-decarboxylase-bouillon, aminosyrer (lysin, ornithin, arginin), flydende paraffin, isolerede kolonier eller rene kulturer af bakterie.

Procedure:

1. Ingredienserne i aminosyre-decarboxylase-bouillonmedium (indeholdende glucose og bromcresolpulver som hovedkomponenter) eller dets færdige pulver, der kræves til 400 ml af bouillon, vejes og opløses i 400 ml destilleret vand i en 500 ml konisk kolbe ved at ryste og hvirvle (figur 7.11).

2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af en pH-papir eller pH-meter og justeres til 7, 2 ved anvendelse af 0, 1 N HCI, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1 N NaOH, hvis det er mindre. Kolben opvarmes om nødvendigt for at opløse ingredienserne fuldstændigt.

3. 400 ml bouillon fordeles i fire 250 ml koniske kolber, således at hver kolbe indeholder 100 ml bouillon.

4. Til tre af disse kolber sættes tre aminosyrer, såsom lysin, ornithin og arginin separat (0, 5 gram hver) og en holdes uden nogen aminosyre for at tjene som kontrol. Kontrolen bruges til at skelne mellem de to-trins farveændringer i testmediet (dvs. fra lilla til gul og fra gul tilbage til lilla).

5. Bønden i de fire koniske kolber fordeles i fire separate sæt reagensglas (ca. 10 ml hver), bomuldsplugget, dækket med håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.

6. Væskenørene steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Væskenørene får lov at afkøle til stuetemperatur.

8. Flydende paraffin steriliseres ved opvarmning ved 180 ° C i 3 timer i en varmluftsovn.

9. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i bouillon ved hjælp af en inokuleringssløjfe steriliseret over bunsenflammen. Sløjfen steriliseres efter hver inokulation.

10. Den steriliserede flydende paraffin hældes forsigtigt aseptisk i de inokulerede rør (ca. 1 cm højt på mediet) for at tilvejebringe anaerob tilstand.

11. De podede bouillonrør inkuberes ved 37 ° C i en inkubator og observeres dagligt indtil testen er positiv eller i en maksimal periode på 4 dage.

Observationer: