Forskellige kemikalier og medier anvendt i et mikrobiologisk laboratorium

Forskellige kemikalier og medier anvendt i et mikrobiologisk laboratorium!

I laboratoriet dyrkes bakterier på næringsrige stoffer kaldet 'medier'. En række medier er også nødvendige for specifikke anvendelser.

Mediernes komponenter vejes i en given mængde, blandes i den nødvendige mængde vand og steriliseres i autoklav. Bakterier inokuleres i det og får lov til at vokse.

At veje ingredienserne i medierne er et kedeligt job, og nogle ingredienser kan blive savnet ubevidst. For at overvinde denne vanskelighed er nu-til-dag færdige medier i pulverform til rådighed.

Disse medier indeholder alle ingredienserne i de fastsatte proportioner. Til en bestemt mængde af pulvermediet (som nævnt på pakningens etiket) tilsættes og specificeret mængde vand og steriliseres.

Kulturmedier er af følgende typer:

I. Kemisk definerede medier:

Kemisk definerede medier eller syntetiske medier er medierne, hvor alle specifikke kemikalier (molekyler og atomer) og deres koncentrationer kan bestemmes. Kemikalierne kan indbefatte H20, NaCl, Na2S04, KCl og agar. Eksempler: uorganisk syntetisk bouillon, glucosesalt bouillon.

II. Komplekse medier:

Komplekse medier er medierne, hvor alle specifikke kemikalier (molekyler og atomer) og deres koncentrationer ikke kan bestemmes. Til hurtige bakterier anvendes få komplekse stoffer som oksekstrakt, gærekstrakt og pepton i medierne, hvis eksakte kemiske sammensætning (molekyler og atomer) varierer betydeligt og er ikke kendt. Disse medier anvendes hovedsageligt til kraftig vækst af bakterier. Eksempler: næringsstof bouillon og næringsstof agar.

III. Specialiserede medier:

Disse medier bruges til specifikke formål, snarere end kun for væksten af ​​bakterier.

Baseret på brugsformålet er de af følgende typer:

1. Selektive medier:

De er medierne indeholdende en specifik sammensætning af ingredienser, som understøtter væksten af ​​nogle målbakterier og hæmmer væksten af ​​de andre. De er vant til at isolere specifikke grupper af bakterier.

Når en bestemt gruppe bakterier vokser i et selektivt medium, manifesterer man typiske koloniegenskaber, som hjælper med at detektere og opregne i forskellige prøver. De særlige bakterier af interesse, der findes som isolerede kolonier, tages til yderligere test for bekræftet identifikation. Sommetider bruges selektive medier også som differentierede medier.

Eksemplerne på selektive medier er angivet nedenfor:

(a) MacConkey Agar:

Det er vant til at vokse gram-negative bakteriearter. Den krystalviolet, der anvendes i mediet, hæmmer væksten af ​​gram-positive bakterier, samtidig med at de gramnegative arter kan vokse.

(b) EMB Agar:

Eosin methylenblåt agar (EMB agar) bruges til at dyrke gram-negative bakteriearter. Det hæmmer delvis væksten af ​​gram-positive bakterier, som følge af, at de gram-negative bakterier vokser i det mere voldsomt. Det bruges også til identifikation af den enteriske coli form Escherichia coli, der vokser på den som blå-sorte kolonier med en metallisk grøn glans.

Andre enteriske coliformer, såsom Enterobacter aerogenes, vokser på det som tykke, mucoide, rosa kolonier. Udover disse laktosefomentere vokser laktosfrifomenter også på den, men som farveløse kolonier, for hvilke de optager lilla farve i mediet.

(c) Mannitol Salt Agar:

Det bruges til at vokse Staphylococcus spp. Den høje saltkoncentration (7, 5% NaCl), der er til stede i mediet, hæmmer væksten af ​​de fleste andre bakterier. Det differentierer også Staphylococcus til mannitol-fermenterende Staphylococcus, som vokser med gule zoner, der omgiver kolonierne og mannitol-ikke-fermenterende Staphylococcus, som vokser uden farveændring.

2. Differentielle medier:

De er medierne, hvor forskellige bakterier vokser som kolonier, med forskellige visuelle egenskaber.

Eksemplerne på forskellige medier er angivet nedenfor:

(a) MacConkey Agar:

På dette medium vokser de ikke-patogene normale intestinale bakterier, som er lactose-fermentorer, som røde kolonier, mens de patogene intestinale bakterier, som er lactose-ikke-fermentorer, vokser som farveløse kolonier.

(b) blodagar:

Blod er den vigtige bestanddel af dette medium. Det er en berigelsesbestanddel for de hurtige bakterier som Streptococcus spp.

Det er vant til at differentiere egenskaberne af streptokokker for at producere forskellige typer hæmolyse af blod som følger:

(i) a-hæmolyse:

Her forekommer delvis ødelæggelse af RBC, hvilket resulterer i grønne farvezoner omkring kolonier som følge af reduktion af hæmoglobin til methemoglobin.

(ii) p-hæmolyse:

Her forekommer fuldstændig hæmolyse af RBC, hvilket resulterer i en klar zone omkring kolonier. Denne hæmolyse er forbundet med to typer hæmolysiner, nemlig 'streptolysin O', som er et antigenisk oxygenlabilt enzym og 'streptolysin S', som er et ikke-antigenisk oxygenstabilt lysin.

(iii) y-hæmolyse:

Her forekommer der ingen hæmolyse, hvilket resulterer i ingen zone omkring kolonier.

3. Transportmedier:

De er medierne til korttransport af bakterier, hvor vækst er uønsket. Sådanne medier indeholder kun buffer og salt. Medierne indeholder ikke nogen kilde til C, N og andre vækstfaktorer. Det forhindrer mikrobiell vækst.

4. berigelsesmedier:

De er medierne, hvor den relative andel af målbakterierne er beriget, da de indeholder næringsstoffer til målbakterierne, mens ingen for de andre. For eksempel indeholder fækalt stof meget lavt antal Salmonella og Shigella.

For at isolere dem dyrkes de først i selenit bouillon eller GN (gram-negativ) bouillon, hvor kun Salmonella og Shigella vil vokse voldsomt, mens andre ikke vil vokse og forblive i forsinkelsesfasen. Derefter strikkes dette på fast medium for at opnå kolonier af Salmonella og Shigella.

5. berigede medier:

De er medierne, der bruges til at understøtte væksten af ​​maksimale bakterier.

6. Biokemiske medier:

Disse medier bruges til at teste biokemiske aktiviteter af bakterier, som hjælper med at identificere dem. En liste over vigtige biokemiske medier, der anvendes i de biokemiske tests, der udføres til identifikation af forskellige bakterier, gives nedenfor.