Citrat udnyttelsesprøve for at kontrollere evnen af en bakterier til at udnytte citrat som kilden til kulstof

Målet er at udføre citratudnyttelsesprøve for at finde ud af en bakteriers evne til at udnytte citrat som eneste kilde til kulstof.

Princip:

Nogle bakterier har evnen til at vokse i medier uden organisk C og N.

De kan anvende natriumcitrat som eneste kilde til C og ammoniumdihydrogenphosphat (NH4H2P04) som eneste kilde til N. De udnytter NH4H2P04 for at få N med produktion af NH3, hvilket øger pH resulterer i en ændring i farven af bromothymolblå fra grøn (pH = 6, 9) til blå (pH over 7, 6).

I citratudnyttelsesprøven dyrkes testbakterierne på agarskrævninger, der ikke indeholder nogen organisk C eller N, der snarere indeholder natriumcitrat, NH4H2P04 og bromothymolblåt. Hvis bakterierne har evnen til at udnytte citrat som den eneste kilde til C, viser den vækst på skråningerne. Det udnytter også NH ₄ H ₂ P0 ₄ som den eneste kilde til N, hvilket medfører en ændring i slangernes farve fra grønt til blåt.

Materialer krævet:

Testrør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringsnål, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, kassér krukke, inkubator, Simmons citratagar, isolerede kolonier eller rene bakteriekulturer.

Procedure:

1. Bestanddelene i Simmons citrat agarmedium (indeholdende natriumcitrat, NH4H, P04 og bromothymolblåt som hovedingredienserne) eller dets færdige pulver, der kræves til 100 ml af mediet, vejes og opløses i 100 ml destilleret Vand i en 250 ml konisk kolbe ved omrystning og hvirvling (Figur 7.6).

2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af en pH-papir eller pH-meter og justeres til 6, 9 ved anvendelse af 0, 1N HC1, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1N NaOH, hvis det er mindre.

3. Kolben opvarmes for at opløse agaret i mediet fuldstændigt.

4. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand i 5 reagensglas (ca. 20 ml hver).

5. Testrørene er bomuldstoppede, dækket af håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.

6. De steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Efter sterilisering fjernes de fra autoklaven og holdes i en skrånende position for at afkøle og størkne mediet for at få citrat-agarskærer.

8. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i skråningerne ved at stikke ind i rækken og striber på overfladen af skråningerne ved hjælp af en flamsteriliseret nål. Nålen steriliseres efter hver inokulation.

9. De podede slanger inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i en inkubator.