Carbohydrat Fermentation Test på Bakterier for at finde ud af deres evne til at fermentere kulhydrater

Carbohydrat Fermentation Test på Bakterier for at finde ud af deres evne til at fermentere kulhydrater!

Princip:

Nogle bakterier har evnen til at fermentere kulhydrater, især sukkerarter. Blandt dem kan hver bakterie kun gærre nogle sukkerarter, mens den ikke kan gærre de andre.

Således kan sukkerne, som en bakterier kan fermentere og sukkerne, som det ikke kan karakteriseres af bakterierne.

Karbohydratgæringstesten udføres for at teste særskilt bakteriernes evne til at fermentere sukkerarterne som glucose, saccharose, lactose, maltose og xylose såvel som deres alkoholholdige derivater som aesculin, salicin, adonitol, dulcitol og sorbitol. Hvis bakterierne kan fermentere et sukker eller sukkerderivat, produceres syre, hvilket reducerer pH, der ændrer farven på bromocresol lilla fra lilla til gul.

Hvis der er tale om en "aerogen bakterie", produceres både syre og gas (C02), mens der er tale om ananero-bakterier, produceres kun syre uden gas. Produktion af gas er indikeret ved dens ophobning som en boble i et omvendt Durham-rør (et miniaturerør).

I kulhydratgæringstesten dyrkes testbakterierne i et bouillonmedium indeholdende et af sukkerarterne eller sukkerderivaterne og bromocresolpulver. Et omvendt Durham rør holdes nedsænket i det.

Hvis bakterierne "har evne til at fermentere sukker eller sukkerderivatet, ændres bouillonens farve fra lilla til gul. Hvis gasakkumulering ses som en boble i Durham-røret, er det en acrogen bakterier, mens der ikke er nogen gasakkumulering, er det en anaerogen bakterie.

Materialer krævet:

Testrør, Durham-rør, konisk kolbe, bomuldspropper, inokuleringssløjfe, autoklave, bunsenbrænder, laminarflowkammer, bortskaffes krukke, inkubator, kulhydrat bouillon (bouillon indeholdende de specifikke sukker- eller sukkerderivater som glucose, saccharose, lactose, maltose, xylose, aesculin, salicin, adonitol, dulcitol, sorbitol etc.), isolerede kolonier eller rene kulturer af bakterier.

Procedure:

1. Ingredienserne i kulhydrat bouillonmedium (indeholdende det krævede kulhydrat og bromocresolpurpur som hovedkomponenterne) eller dets færdige pulver, der kræves til 100 ml bouillon, vejes og opløses i 100 ml destilleret vand i en 250 ml konisk kolbe ved at ryste og hvirvle (figur 7.8).

2. pH-værdien bestemmes ved anvendelse af en pH-papir eller pH-meter og justeres til 6, 8 ved anvendelse af 0, 1N HC1, hvis det er mere eller ved anvendelse af 0, 1N NaOH, hvis det er mindre. Kolben opvarmes om nødvendigt for at opløse ingredienserne fuldstændigt.

3. Kødet distribueres i fem reagensglas (ca. 10 ml hver).

4. Et Durham rør sættes i omvendt tilstand i bouillon i hvert reagensglas. Durham-rørene indeholder luft i dem og flyder. Under sterilisering fortrænger varm damp denne luft, på grund af hvilken de nedsænker i bouillon. Således er der ikke behov for at fjerne luft inde fra Durham-rørene ved at fylde dem med bouillon før sterilisering for at holde dem nedsænket i bouillon.

5. Testrørene er bomuldstoppede, dækket af håndværkspapir og bundet med tråd eller gummibånd.

6. Væskenørene steriliseres ved 121 ° C (15 psi tryk) i 15 minutter i en autoklav. Alternativt steriliseres 90 ml af det basale medium (medium uden kulhydratet) i autoklaven, og efter afkøling tilsættes der 10 ml kulhydratopløsning (10%) steriliseret ved membranfiltrering efter afkøling. Dette er især vigtigt for varmefølsomme kulhydrater, som undergår nedbrydning under varmsterilisering.

7. Væskenørene får lov at afkøle til stuetemperatur.

8. Testbakterierne inokuleres aseptisk, fortrinsvis i et laminært strømningskammer, ind i bouillon ved hjælp af en inokuleringssløjfe steriliseret over bunsenflammen. Sløjfen steriliseres efter hver inokulation.

9. De podede bouillonrør inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i en inkubator.